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毛囊干细胞分离培养

作者:雍禾植发        

  毛囊干细胞的分离培养

  毛发的周期性自我更新以及生长依赖于毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)周期性增殖和分化。目前研究认为HFSCs 定位于毛囊外根鞘的隆突区,大致是毛囊外根鞘最外层靠近立毛肌附着点处。研究HFSCs 对于秃发的发病机制、毛囊组织工程以及干细胞或基因治疗秃发方面均有重要理论和临床意义。

  有关毛囊干细胞分离培养的研究,目前在多数实验室中以鼠的触须毛囊、外科获取的人头皮样本为毛囊干细胞的组织来源。样本经中性蛋白酶(dispase II)处理,分离去除表皮,或者用胰酶/EDTA处理收集的毛囊组织,货的单细胞悬液培养毛囊干细胞。人毛囊干细胞的分离较为困难,因为人毛囊bulge区没有明确的形态学特征,外根鞘隆起不明显”。其次,人毛囊干细胞缺乏特异的毛囊干细胞标记物。

  人们利用成人枕、颞部的全层头皮,用显微切割方法分离出人毛囊bulge区,对分离的细胞进行CD200免疫荧光标记后,用磁珠分选的方法获得了高纯度的人毛囊干细胞。Kloepper等发现以CD200、K19作为阳性标记物,CD34、nestin为阴性标记物,可以更好地鉴定人毛囊干细胞,提示在利用于细胞标记物进行毛囊干细胞分离时,将阳性标记物与阴性标记物加以组合,分离的效果更为有效及实用。

  有人应用CD200、frizzled受体、CD34、CD71、CDl46等一系列阳性及阴性标记物,对人毛囊bulge区进行免疫荧光标记后,为了最大数量地获得毛囊bulge干细胞,他们又对毛囊bulge区进行了不同于传统的横向切片,然后用激光显微切割法分离切片中的bulge区,得到了数量众多的、标记物表达特征为CD200hiCD24loCD34loCD7lloCDl46lo、具有高克隆形成率及多向分化潜能的人毛囊干细胞

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